Типы ПЦР

Автор: | 16.08.2018

ПЦР – важнейший метод диагностики инфекционных заболеваний.

Сегодня большинство лабораторий делают анализы на ИППП и другие инфекционные патологии при помощи реакции амплификации нуклеиновых кислот. Она очень точная, позволяет диагностировать болезнь даже на начальных стадиях.

Для диагностики туберкулеза все чаще применяют именно ПЦР. Ранее болезнь можно было выявить только с помощью микроскопии или посева мокроты. Используется также ИФА для определения антител в крови. Но все эти способы менее чувствительны. Они помогают подтвердить диагноз только при наличии большого количества бактерий.

ПЦР обнаруживает туберкулез даже в доклинической стадии. В том числе в случаях, когда культуральное исследование дает ложноотрицательные результаты. Исследовать можно любой клинический материал. Это может быть мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, смывы бронхов, менструальная кровь и т.д., в зависимости от предполагаемой локализации инфекции.

мокрота на пцр анализ

ПЦР качественный на гепатит С

Анализ на гепатит Ц, если он качественный, может быть положительным или отрицательным. В ходе исследования обнаруживается РНК вируса. Это один из основных маркеров гепатита.

В ходе диагностики могут быть использованы тест-системы с разной чувствительностью. Тесты бывают малочувствительные и высокочувствительные.

Первые обходятся значительно дешевле. В этом их основное преимущество. Но в то же время они выявляют вирус лишь в концентрации от 50 МЕ/мл и более. То есть, не исключены ложноотрицательные результаты.

По рекомендации ВОЗ, диагноз гепатит С может быть установлен, если три раза проведенное исследование ПЦР обнаружило РНК вируса. Это один из наиболее ранних методов диагностики.

ПЦР становится положительной, даже когда антитела ещё не появляются. РНК в крови может быть обнаружена уже через 1-2 недели после заражения.

Существуют также высокочувствительные тесты. Таковыми считаются те, что определяют РНК при концентрации 25 МЕ/мл или меньше. Такие диагностические тесты обходятся дороже низкочувствительных в несколько раз. Но иногда необходимость в их проведении все же возникает.

Основные случаи, когда высокочувствительный тест ПЦР необходим:

  • Антитела положительные, но РНК в крови не обнаруживается.

Наличие одних только антител не дает оснований установить диагноз. Потому что антитела могут говорить и о перенесенной в прошлом инфекции. Требуется подтверждения путем выявления РНК. И если концентрация её низкая, обычный тест ПЦР может дать отрицательный результат. В таком случае проводят высокочувствительный тест. Он позволяет с высокой достоверностью либо подтвердить, либо исключить диагноз.

проведение пцр

  • Наличие признаков поражения печени.

Если анализ на антитела отрицательный, а признаки поражения печени присутствуют, врач может назначить высокочувствительный тест ПЦР на гепатит С. Потому что отрицательные антитела не говорят о том, что болезни нет. Вполне вероятно, что инфицирование состоялось недавно, и АТ ещё не успели синтезироваться. Кроме того, их может не быть при иммунодефиците человека или в случае лечения иммунодепрессантами.

  • Оценка эффективности терапии.

Согласно европейских рекомендаций 2015 года, для оценки вирусологического ответа на терапию должны использоваться только высокочувствительные тесты ПЦР. Данный метод диагностики используется также для выявления гепатита В. В ходе диагностики определяется фрагмент ДНК. Это самый ранний тест, позволяющий обнаружить вирус ещё на начальном этапе болезни.

Читать также  ПЦР на ВИЧ

ПЦР может использоваться:

  • для уточнения результатов при отрицательном исследовании на HBsAg;
  • в качестве скринингового теста;
  • для обследования лиц, контактирующих с больным гепатитом В;
  • с целью контроля лечения;
  • для обнаружения обострения хронического гепатита В.

Доктор может назначить этот анализ при наличии желтухи или цирроза печени, а также в случае лабораторных признаков поражения печени. Расшифровка результатов проводится врачом.

ПЦР количественный гепатит С

В некоторых случаях проводится количественный анализ ПЦР на гепатит С. По итогам исследования доктор получает числовое значение. Оно определяет вирусную нагрузку. Расшифровать анализ не трудно. Возможные такие результаты:

  • вирус не обнаружен;
  • вирус обнаружен, его концентрация составляет менее 100 МЕ/мл;
  • вирус обнаружен, концентрация указывается в числовом выражении от 100 до 100 миллионов МЕ/мл;
  • вирус выявлен в количестве более 100 миллионов МЕ/мл.

Назначается такое исследование в основном перед началом лечения для определения оптимальной терапевтической тактики. Кроме того, в процессе терапии оценка вирусологической нагрузки позволяет оценить эффективность применения медикаментозных средств.

На гепатит Б тоже проводится количественный тест ПЦР. Показания – аналогичные.

Метод выявления генотипа вирусов с помощью реакции амплификации нуклеиновых кислот используется также при многих других патологиях. Например, при папилломавирусной инфекции.

Сам факт наличия ВПЧ в организме установить нетрудно. Для этого достаточно осмотра – на коже и слизистых появляются бородавки или кондиломы. Но разные вирусы несут разную степень опасности. Некоторые из них всего лишь доставляют психологический дискомфорт, провоцируя появления бородавок. В то же время другие грозят злокачественными онкологическими новообразованиями. Чтобы понять, чего можно ждать от вируса, проводится ПЦР на онкогенные типы. В основном это типы 16, 18, а также 31 и 33.

симптомы впч

Есть и более углубленные исследования. Они предполагают дополнительное определение других типов ВПЧ высокого онкогенного риска.

Зачем это нужно?

При обнаружении опасных вирусов избавиться от них все равно невозможно. Потому что не существует пока что препаратов, уничтожающих ВПЧ полностью. Но пациента с угрозой появления злокачественных новообразований берут под контроль. Он регулярно наблюдается у доктора.

В большинстве случаев рак не появляется на пустом месте. Особенно если речь идет о раке шейки матки – самом частом онкологическом процессе, который запускают вирусы папилломы. Ему предшествуют диспластические изменения. Их можно своевременно выявить и вылечить. Поэтому в случае обнаружения у женщины высокоонкогенных ВПЧ, она должна регулярно сдавать мазки на онкоцитологию и проходить гинекологические осмотры.

ПЦР качественный или количественный

Качественный метод ПЦР имеет значительное отличие от количественного. Оно состоит в том, что результат выдается обнаружено или не обнаружено. Тогда как количественный дает числовое значение. Он необходим в ряде случаев. Например, чтобы оценить, прогрессирует ли болезнь (увеличилась ли вирусная нагрузка).

С помощью количественного исследования можно проверить, эффективно ли проходит терапия (уменьшилась ли вирусная нагрузка). Определяются показания к лечению заболевания. Например, при низкой концентрации патогена может применяться тактика наблюдения, а при увеличении популяции назначается лечение.

Читать также  Анализ на микоплазму: разновидности, показания и расшифровка

интерпретация результатов пцр анализа

Разновидности ПЦР

Существует большое количество видов полимеразной цепной реакции. Рассмотрим некоторые из них, которые активно используются в медицине.

Real Time PCR

Одной из разновидностью ПЦР является Real Time PCR. RT PCR предполагает определение ДНК возбудителя в режиме реального времени и оценку количества копий специфических фрагментов нуклеиновых кислот. Для этого могут использоваться различные методы. В основном применяется один из двух способов:

  • ДНК-зонды;
  • флюоресцентные красители.

Метод очень похож на обычную ПЦР. Здесь есть все те же самые этапы. Вначале проводится денатурация ДНК. Затем – отжиг праймеров. При RT PCR детекция продукта производится по мере его накопления. Методика широко используется в различных областях медицины и науки. В первую очередь это диагностика заболеваний. С помощью ПЦР в реальном времени можно оценить вирусную или бактериальную нагрузку. Оценивается эффективность лечения – врач смотрит, уменьшилось ли количество ДНК возбудителей в организме человека. Метод применяется и в онкологии. С его помощью можно провести детекцию атипичных клеток в солидной опухоли. А также определяются циркулирующие опухолевые клетки.

Real Time PCR применяется в микробиологии. Метод используется для оценки количественных показателей нормальной микрофлоры человека, например, в кишечнике или во влагалище.

забор мазка на фемофлор

RAPD

RAPD – это не отдельный анализ. Это ПЦР-маркер. Он считается наиболее распространенным.

В ходе анализа используется единичный короткий праймер. Обычно он имеет 10 членов.

Нуклеотидная последовательность – произвольная. Иногда в RAPD используется сразу несколько праймеров.

PCR RFLP – способ определения ДНК путем её разрезания. Для этого используются ферменты эндонуклеазы рестрикции. В последующем фрагменты анализируются путем электрофореза. Метод используется для определения генов, отвечающих за различные заболевания, склонность к которым передается по наследству. А также для определения генетического родства двух людей.

ПЦР с обратной транскрипцией

Существует множество других видов ПЦР.

Реакция с обратной транскрипцией предполагает превращение РНК в одноцепочечную ДНК с помощью обратной транскриптазы. Затем проводится обычная ПЦР для анализа последовательности нуклеотидов.

Метод позволяет обнаружить РНК даже в минимальном количестве. Он применяется в диагностике ВИЧ и некоторых генетических заболеваний. Другие виды ПЦР:

  • вложенная – особенностью является применение двух пар праймеров;
  • инвертированная – предполагает несколько разрезаний и сшиваний ДНК, в результате чего известные фрагменты оказываются на двух концах неизвестного;
  • асимметричная – предполагает использование избытка одного праймера;
  • ступенчатая – проводится при температуре выше оптимальной, которая постепенно уменьшается до оптимума;
  • виртуальная – проводится с помощью компьютерного анализа, который предсказывает потенциальную амплификацию ДНК.

ПЦР на герпес 6 типа

Анализ может использоваться для выявления любых вирусов. В том числе семейства герпеса.

Могут быть определены возбудители 1 и 2 типа. ВПГ 1 и 2 типа могут вызывать лабиальный или генитальный герпес. Первый чаще вызывает поражение губ. Второй – обычно вызывает воспалительные процессы мочеполовой системы.

пузырьки при генитальном герпесе
Выявляются также:

  • третий тип – ветряная оспа;
  • четвертый – вирус Эпштейна-Барр;
  • пятый – цитомегаловирус;
  • шестой – розеоловирус;
  • седьмой – провоцирующий саркому Капоши.

В нашей клинике можно обследоваться на любые инфекции методом ПЦР. Результаты анализов можно получить быстро, и при необходимости – анонимно.

Отправить ответ

Оставьте первый комментарий!

avatar
  Subscribe  
Notify of