Гонококки: диагностика

Гонококки (Neisseria gonorrhoeae) относятся к грамотрицательным кокам, встречающимся преимущественно парами. Бактерия вызывает триппер (гонорею). Это инфекционный процесс с преимущественным поражением слизистых оболочек мочеполового аппарата.

В редких случаях становится причиной бленнореи – гнойного патологического процесса соединительной оболочки глазного яблока. Диагностика гонококков требуется пациентам после незащищенной сексуальной близости с малознакомым партнером. Либо при подозрениях на инфицирование (иногда патологический возбудитель передается через полотенце или мочалку).

Лабораторная диагностика гонококков состоит из:

• микроскопического метода (окраска двух мазков)
• бактериологического (посев на питательные среды)
• реакции Борде-Жангу (серология)
• ПЦР

Свойства гонококка Neisseria gonorrhoeae

Гонококки – разновидность грамотрицательных диплококков, относятся к роду Neisseria. Для гонококков характерна высокая выживаемость в условиях организма. Вне приемлемой среды обитания для жизнедеятельности (во внешней среде) бактерии гибнут.

Также это происходит в результате высыхания субстрата при температуре от 40 градусов. Быстро погибают под воздействием антисептических и антибактериальных растворов, солей серебра и в мыльной воде.

Как выглядят гонококки?

Две половинки парной бактерии схожи на кофейные зерна, соприкасающиеся друг с другом вогнутой стороной. Под угрозой гибели (к примеру, на фоне антибиотикотерапии) трансформируются в L-форму.
 

Методы лабораторной диагностики

Инкубационный период длится от 3 до 7-ми дней с момента инфицирования. Дальнейшая клиника проявляется острыми симптомами. Это слизистые, с примесями гноя выделения из половых путей, чувство жжения, болезненность в уретре, в особенности при опорожнении мочевого пузыря).

Либо болезнь принимает бессимптомное течение. Анализ на гонококки Нейссера проводится различными способами.

Наиболее информативным считается ПЦР, так как позволяет обнаружить ДНК-возбудителя уже в первые несколько дней после проникновения бактериального агента в организм. У женщин в несколько раз чаще гонококковая инфекция имеет хроническую форму, при которой симптомы отсутствуют.

Возможность выявить гонококки в мазке ПЦР можно через 2-3 дня после сексуального контакта с зараженным партнером. Также применяются другие методы исследования, не менее информативные и позволяющие дополнительно определить чувствительность бактерий к антибиотику.

Микроскопический (бактериоскопический) метод

Анализ на гонококки проводится с использованием микроскопа и методики окраски двух мазков – по Грамму и с применением 1% жидкого раствора метиленового синего и 1% Эозина.

Для исследования наибольшую ценность представляют патологические жидкости. Забор которых производится из мочеиспускательного канала, влагалища, ануса, глотки или крови.

Метод Грамма

Обнаружить гонококки можно с помощью двойной окраски с применением двух красителей.

Первый – основной, второй считается дополнительным. Помимо красителей используется спирт и различные кислоты. Их действие заключается в обесцвечивании бактериального агента. Для выявления возбудителя гонореи применяются анилиновые красители (кристаллвиолет, метиловый фиолетовый) и дополнительные.

После обесцвечивания грамотрицательных диплококков используется фуксин. Он придает гонококкам красный окрас, определяющего идентифицирующего наличие гонококка.

Ход исследования:

1. Биоматериал наносят на предметное стекло тонким слоем
2. Следующий этап – сушка
3. Проводится окраска анилиновыми красителями, промывка водой и использование раствора Люголя
4. После высыхания материал фиксируется – необходимо для того, чтобы бактериальные клетки остались на поверхности стекла и не смылись. Для фиксации применяют один из двух методов – облучение бактериального агента высокими температурами либо применение специальных препаратов, приводящих к коагуляции цитоплазмы
5. Далее стекло промывают и дополнительно применяют контрастные краски, после чего бактерии выделяются красным либо розовым цветом, после чего их легко обнаружить

Применение метиленового синего в микроскопическом исследовании

Взятый биоматериал наносится на предметное стекло и фиксируется 96 % этанолом либо над спиртовой горелкой. После полного высыхания мазка выполняется его окрас 1% р-ром метиленовой синьки. Спустя 1 минуту предметное стекло промывают в проточной воде комнатной температуры, подсушивают и помещают под микроскоп для изучения.

Анализ мазка на гонококк позволяет отличить патологическую микрофлору, которая принимает выраженный синий окрас (может иметь различные оттенки). Под микроскопом отличаются бактерии, размещенные парно, их бобовидная форма.

Характерной особенностью остро протекающего инфекционного заболевания является месторасположение возбудителя. То есть внутри гранулоцитарных лейкоцитов, которые выявляются в больших количествах на эпителии и в слизистой.

Для хронического течения характерно отсутствие гонококков при данном исследовании. В единичных случаях бактериальный агент идентифицируется, но в нетипичном для него виде.

Гонококки представлены мелкими или крупными шарообразной формы формированиями. Также выявляется другая патологическая флора, клетки эпителия и белые кровяные клетки (лейкоциты).

Бактериологический способ

Бактериологический или культуральный метод – производится посев биоматериала больного на питательные среды с белками, имеющими нативную пространственную структуру, сыворотку.

Чаще применяются безасцитные питательные среды. Основой которых является мясопентонный агар (производится из мяса кроликов или бычьих сердец). По результатам посевов на гонококки определяется не только возбудитель инфекции, но и его чувствительность к антибиотикам.

Точность и достоверность исследования во многом зависит от правильности сбора биоматериала. Важно использовать стерильные емкости и соблюдать правила подготовки к сбору анализа.

Сдача крови производится медицинским работником в условиях лаборатории.

Мочу пациенты собирают самостоятельно, используя для этого стерильную емкость.

Доставка биоматериала должна быть быстрой.

Мазки из половых путей или уретры выполняются в лаборатории и сразу наносятся на питательные среды. Очень важно провести диагностику до начала приема антибактериальных средств. В противном случае результативность проведенного анализа дает недостоверные результаты.

Если обследование назначается для контроля проведенной терапии, следует выждать не менее 10-ти дней после приема последней дозы антибиотика. При острой необходимости анализ проводится раньше.

Для исследования, отделяемого из половых путей у женщин производится забор материала через две недели после окончания менструации. За несколько часов запрещается опорожнение мочевого пузыря.

Мужчинам перед сдачей выделяемой слизи на анализ следует удержаться от посещения туалета в течение 4-5 часов.

Через сколько времени будет готов результат?

Культуральный метод занимает от 4-х дней. Все зависит от исследуемого материала – исследование каловых масс занимает от 3-4 дней до недели.

Соскоб из уретры будет готов в течение 7-ми дней, кровь – через 10. Несмотря на длительность диагностики, предварительные результаты анализа озвучиваются на 3-ий день.

Что показывает бактериологическая диагностика?

Расшифровка исследования включает информацию о наличии бактериального агента, а также о его концентрации. Определение количества присутствующей патологической микрофлоры имеет большое значение.

Выделяют 4 степени роста гонококков:

• 1 степень (отсутствует рост бактерий на твердой среде, на жидкой – незначительный рост)
• 2 степень (рост до 10 колоний)
• 3-я (рост от 10 до 100 колоний)
• 4-я (больше 100 колоний)

Первые две степени не являются этиологическими факторами развития болезни.

В данном случае говорят о загрязненности исследуемого биоматериала. Последние две степени (3 и 4) говорят о том, что присутствующие микроорганизмы стали причиной развития инфекционных процессов.

Окончательная расшифровка (подсчет колоний КОЕ/мл) имеет следующий вид:

• 102 – 103/мл – 1 колония
• 104/мл – 0т 2 до 5 колоний
• 105/мл – от 6 до 15 колоний
• 106/мл и более – от 16 колоний

Диагностика имеет весомое значение для контроля проводимой антибиотикотерапии и позволяет оценить ее эффективность.

Серологический метод

Методика основывается на иммунологической реакции выявления антител (Реакция Борде-Жангу) в плазме крови больного с подозрением на заражение гонококковой инфекцией. Зачастую используется для диагностики бессимптомных форм патологии.

В современной исследовательской практике серологический метод мало информативен. Не применяется для контролирования состояния после медикаментозной терапии.

Диагностика методом ПЦР

Определение гонококков при анализе ПЦР наиболее точный метод. Позволяет уже в впервые дни после заражения идентифицировать бактериального возбудителя.

Для получения максимально верных результатов огромное значение имеет подготовка:

• исключить сексуальный контакт за сутки
• после приема антибиотиков должно пройти не менее 7-ми дней
• перед взятием мазка запрещается посещение туалета за 2-3 часа
• не проводится у женщин вовремя месячных

Для диагностики триппера производится забор материала из мочеиспускательного или цервикального канала, можно использовать мочу.

Если в исследуемом биоматериала обнаруживают ДНК гонококков – это говорит о наличии гонореи. Информативность диагностики составляет 98%. Анализ проводится в течение 1-3 дней, что зависит от оснащенности лаборатории и квалификации специалистов.

Основным преимуществом исследования на гонококки является возможность выявления бактериального возбудителя даже при условии его минимальной концентрации в мазке (моче). В лабораторных условиях производится размножение генов возбудителя.

Клонирование ДНК участка, даже если он единичный, позволяет выявить всю имеющуюся патологическую флору в материале. Так, в большинстве случаев исследование на гонококки определяет одновременно диплококков и трихомонад, которые также передаются при половом акте.

Анализ ПЦР высоко информативен на ранних стадиях. Поэтому диагностика рекомендуется пациентам при частой смене половых партнерах или случайной сексуальной связи, в первые дни после интимной связи. Проведенная терапия на начальных стадиях болезни предотвращает развитие неприятных симптомов и возможные осложнения.

Расшифровка анализа ПЦР на гонококки выглядит следующим образом:

• высокий уровень лейкоцитов (свыше 10-ти говорит о присутствии воспалительного очага, свыше 20 – острое воспаление)
• повышенная концентрация клеток эпителия (более 10 в поле зрения)
• наличие грамотрицательных кокков, характерной формы

О чем говорит отсутствие гонококковой инфекции в исследуемом материале?

Если в ходе обследования с применением одного из методов в мазке не были обнаружены гонококки? Это говорит о том, что пациент полностью здоров. Либо о том, что в исследуемом материале, взятом из половых путей или уретры, бактерия отсутствует, но может быть обнаружена в других частях тела.

Для подтверждения диагностики выполняется забор материала из ротовой полости, прямой кишки или конъюнктивы глазного яблока. Если симптоматические проявления локализуются вне половой системы, а присутствие гонококков исключено, выполняются другие методы обследования для идентификации возбудителя патологии.

Диагностика после проведенного лечения

При обнаружении гонококковой инфекции лечащий врач-венеролог назначает комплексное лечение. Его основой является антибиотикотерапия.

Так как бактерии быстро адаптируются к пенициллинам, применяются препараты цефалоспоринового ряда. Чаще назначается Цефтриаксон для инъекций либо перорально Цефиксим.

Длительность лечения составляет 10-14 дней. Спустя 2-3 суток после приема последней дозы исследуют мазок из урогенитального тракта на выявление гонококков. Отрицательные результаты говорят о правильно проведенном лечении.

Диагностика после лечения также проводится второй раз через две недели. Отсутствие бактериального возбудителя означает полное выздоровление, больного снимают с учета у венеролога. Обследованию подлежат все половые партнеры.

Как подготовиться к диагностике гонококков?

Для предотвращения получения в ходе диагностики ложноположительных результатов перед взятием материала пациентам необходимо как следует подготовиться.

Соблюдение подготовительного этапа одинаково требуется представителям женского и мужского пола.

Подготовка

Этап подготовки включает:

• Исключение сексуальной близости за трое суток до забора материала
• Прекращение медикаментозной терапии, не только антибактериальных средств, но и других лекарственных групп, в частности химический средств контарацепции (спермициды). При невозможности прекращения приема некоторых препаратов пациент заранее сообщает об этом врачу
• Исключается использование влагалищных суппозиториев, кремов и спреев
• Исключается спринцевание за 3 дня до процедуры
• Гигиена половых органов выполняется накануне вечером, в утро забора мазка и взятия крови подмывание запрещается
• Опорожнение мочевого пузыря производится за 3 часа до исследования. При наличии незначительного количества бактериальных возбудителей существует вероятность вымывания некоторой части совместно с мочой и получение ложноотрицательных результатов
• У женщин манипуляция проводится за 4-5 дней до начала предполагаемых месячных либо спустя несколько дней по завершению. В острых случаях проводится не зависимо от менструального кровотечения

Анализ мазка на выявление гонококка Нейссера выполняется перед началом медикаментозного лечения и несколько раз после окончания.

Методику исследования выбирает лечащий врач, который занимается расшифровкой результатов и разработкой схемы лечения. Самостоятельный прием антибактериальных средств на фоне возникшей клинической картины искажает результаты обследования.

При подозрении на гонорею обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.